细胞学堂丨无血清转换及培养技巧

目前的细胞培养中，在培养基中添加血清是常用的培养方式，但在进行某些细胞实验如药物研究时，因我们并不能完全确定血清的成分、含量和作用是否会对结果产生影响，就需要无血清培养细胞。

 

无血清培养基使用纯的组分、标准的培养基配方，可以重复实验及验证实验数据，并且无血清培养可以控制过度生长从而选择性地促进一种特殊类型细胞的生长，还具有调节细胞增殖或是分化的可能性，可通过选择生长因子的类型、浓度及其他诱导因子而使促进细胞生长增殖的培养基转换为诱导细胞分化的培养基。

 

转换方法

 

要想使细胞适应从有血清到无血清培养的转换，需要保证培养的细胞处于对数生长期，细胞活率大于90%，适应时以较高的起始细胞接种。具体可以采取以下两种方法：

 

直接驯化

 

即直接将有血清培养基换成无血清培养基培养，具体操作如下：

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将细胞离心收集，用少量预热的无血清培养基重悬，并进行细胞计数，确定细胞活率，计算细胞密度；

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当细胞达到3×105-5×105个/mL的密度时接种传代；

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每隔3-5天继续采用此接种密度传代，直到驯化成功。

 

 间接驯化

即分几步将有血清培养基换成无血清培养基培养，其具体操作与直接驯化操作类似，但无血清比例需依次按25%、50%、75%、100%添加，且每次加大比例时要注意细胞状态与密度达到要求才能进行下一步更换。

 

细胞从有血清培养转换为无血清培养基培养时，需要一个适应的过程，与直接驯化相比，间接驯化对细胞要更温和一些，转换时可根据细胞状态选择合适的方法。

 

注意事项

 

无血清培养细胞时，我们还要注意以下事项，让实验少走弯路：

 

01

在使用无血清培养基培养贴壁细胞时，需添加促贴壁和扩展因子，一般为细胞外基质，如纤连蛋白、层粘连蛋白等。同时因贴壁细胞需要用胰酶消化传代，所以在传代时需向无血清培养基中加入含酶抑制剂，以终止酶的消化作用，达到保护细胞的目的，如大豆胰酶抑制剂；

 

02

无血清培养对试剂、水的纯度和仪器的清洁度要求更高，因为在去除血清的时候，同时也去除了一些血清蛋白可能具有的保护和解毒作用；

 

03

针对不同细胞添加不同激素：常见的用来代替血清的激素有生长激素和胰岛素，它们能增加多种不同类型细胞的贴瓶率；氢化可的松能提高胶质细胞、成纤维细胞的克隆形成率，对维持表皮胶质细胞和其他一些上皮细胞的生长是必需的。