细胞学堂 | 培养基颜色改变意味着什么

细胞培养过程中，培养基的颜色变化往往对应着细胞状态。大多数情况下，我们所见的培养基都呈红色，这是因为细胞培养基的PH值大多在7.4左右，添加了酚红的培养基的颜色就是红色。不同成分培养基的颜色会有差异，例如DMEM会比1640颜色深一点，主要是DMEM里面的酚红含量比1640多导致。当然还有部分培养基不含有酚红，呈现的就是无色或者淡黄色。

图1：DMEM培养基正常颜色

 

很多时候，培养基颜色并不是我们所见的红色，而是偏紫或偏黄，不同颜色培养基究竟对应何种细胞状态呢？本期细胞学堂将为您揭晓培养基颜色变化的原因。

 

培养基颜色偏红或者紫

图2：使用了一段时间后的培养基颜色偏深

 

开封了一段时间后的培养基，颜色会比正常深很多，如上图。主要是因为大部分细胞培养基所用的缓冲体系为NaHCO₃，培养基开封后NaHCO₃会分解成CO₂溢出，导致培养基偏碱；可以将培养瓶拧松放置于CO₂培养箱中一段时间后，培养基颜色会变正常。

 

颜色变深的培养基能不能继续使用？

部分细胞能够很快适应培养基的这种PH值波动，放入培养箱后可以正常生长；也有极少数的细胞会比较敏感，造成细胞漂浮过多等情况，如BV2细胞会就比较敏感，可能出现漂浮增多的情况。

Tips：建议配好完-全培养基后，分装到50mL离心管，并于一周内用完，量少时放到15mL离心管里保存。

 

培养基颜色变黄

通常培养基里的酚红指示剂遇酸会变黄，但也有可能是细胞被污染而导致的培养基颜色变黄，以下为几种常见情况：

 

#1

由于细胞代谢产酸，培养了细胞后的培养基会从红变黄，如果培养基是橘黄色，则是细胞健康生长的颜色，无须担心，继续培养即可。

图3：培养细胞后的培养基颜色

 

#2

若细胞状态良好，但换液后培养基颜色变黄快，则可能是因为细胞密度大或消耗过大，提示需要传代了。

图4：培养基快消耗完时的颜色

 

#3

若细胞状态差，生长异常，培养基很快变黄，变浑浊，镜下观察有较多小颗粒物，则有可能是细菌污染（如图5）或支原体污染。轻度污染可用抗生素清洗处理或使用支原体清除试剂，重度污染建议消杀后丢弃。

图5：细菌污染时培养基颜色