​间充质干细胞(MSC)是一种具有高度自我更新和多向分化潜能的干细胞，存在于骨髓、脂肪组织、脐血及多种胎儿组织。在不同的诱导条件下，可以向除造血干细胞以外的，骨、软骨、肌组织、皮肤、脂肪、神经等多种组织分化。间充质干细胞的易获得、易扩增、多潜能等特性使其在再生医学中的应用前景十分光明。

 

对于体外培养的间充质干细胞的鉴定，通常可以根据以下三条标准进行验证。

 

01

细胞形态学观察

可运用组织块贴壁法、酶消化法以及两种方法的结合分离出MSC，通过传代培养后，进行形态学观察。几乎所有的MSC都是贴壁生长，具有较强的贴壁能力。MSC多数呈纤维细胞样生长，少量呈梭形或不规则三角形。

 

02

表面标志物鉴定

可采用流式细胞仪对MSC的细胞表型进行鉴定，MSC属混杂细胞群，其表面抗原也具有非专一性, 它可同时表达间质细胞、内皮细胞和表皮细胞的表面标志，如粘附因子、生长因子和细胞因子受体以及整合素家族等。

 

MSC的细胞表面标志物鉴定标准为：CD105、CD73和CD90的阳性率≥90%；而CD45、CD34、CD14、CD19和HLA-DR呈阴性，阳性率≤5%。（如下图）

流式细胞仪检测 hUC-MSC 的表面标志物

 

需要注意的是，阳性标记不具特异性，并非每个细胞都同时表达CD105、CD73和CD90。

 

03

多向分化潜能鉴定

MSC具有分化为脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞的能力，可通过特异性染色鉴定体外成脂、成骨和成软骨诱导后的分化能力。

 

成脂诱导分化鉴定

细胞成脂分化诱导2周左右，于倒置显微镜下观察，可见细胞质内出现油滴，经油红O染色后为红色。

 

成骨诱导分化鉴定

细胞成骨分化诱导3周左右时，于倒置显微镜下观察，可见不透明区域，经茜素红染色后可见密集的红色沉淀物呈结节状。

 

成软骨诱导分化鉴定

细胞成软骨分化诱导2周左右，于倒置显微镜下观察，可见细胞经阿利新蓝染色为淡蓝色。

 

参考文献

[1] Fernández Vallone VB, Romaniuk MA, Choi H, Labovsky V, Otaegui J, Chasseing NA. Mesenchymal stem cells and their use in therapy: what has been achieved? Differentiation. 2013 Jan;85(1-2):1-10.

[2] 郭子宽. 间充质干细胞及其临床应用中的几个问题[J]. 中国组织工程研究与临床康复, 2012, 16(1):10.

[3] 张德双, 陈娟. 人脐带间充质干细胞的体外获取、鉴定及标记. 华西医学, 2015, 30(11): 2067-2070.