1. 成熟的脂肪细胞可以消化后进行指标检测吗？消化的最优条件是怎样的？

正常第一次消化完是可以检测的，消化会损伤细胞导致细胞破裂脂滴消失，持续传代也会导致去分化现象。消化条件一般用0.25%胰酶，1-2min就可以了，主要还是减少传代消化操作。

 

2. 原代提取的脂肪细胞，是不是主要是前脂肪细胞？需要单独诱导成脂细胞吗？

常规分离方法，培养出来梭形、无油脂的细胞，大多是前脂肪细胞，需要进行诱导成成熟脂肪细胞，再进行脂肪细胞实验。直接分离的成熟脂肪细胞，难度较大，培养周期短，形态也好区分，有明显油脂。

 

3. 前脂肪细胞筛选降脂成分必须诱导分化成成熟脂肪细胞，再进行实验吗？可以直接用前脂肪细胞给药测定其细胞存活率来反应降脂活性吗？

脂肪相关基因表达在脂肪干细胞到成熟脂肪细胞这个过程是动态变化的，筛选降脂成分，建议从成熟脂肪开始，同时检测降脂效果建议从基因表达层面检测分析，或者检测油脂含量，单纯细胞存活率较难反应药效。
 

4. 前脂肪细胞分化过程中，容易漂浮怎么处理？

诱导分化中漂浮现象出现较多，一般是因为培养时间较长，细胞密度过大等导致脱落。建议选用状态好的细胞和效果好的诱导培养基，缩短诱导时间，同时接种控制密度，包被培养皿，增强细胞吸附。

 

5. 诱导成脂肪细胞，只看形态吗？需要其他方法进行鉴定吗？

一般诱导效果好，脂滴大，相差显微镜白光可以观察到油滴，可能会存在误判。建议使用标准检测方法，油红O染色方法鉴定。

 

6. 天花板法培养的干细胞，没有污染，为什么一换液就不贴壁了，也不生长？

天花板法一般培养的是成熟脂肪细胞，换液不贴壁，可能是细胞未贴牢，培养液过多造成漂浮，建议保持少量培养，同时成熟脂肪细胞本身也不增殖。

 

7. 成脂细胞诱导成功后，换基础培养基培养，会去分化吗？

成脂细胞诱导成功后，换普通培养基短时间培养5-7天左右不会去分化，但是经过消化、传代和长时间培养会发生去分化。

 

8. 如果直接取上层的成熟脂肪细胞进行培养的话，可以进行后续的转染实验，或者蛋白提取么？

直接培养成熟脂肪细胞，可以进行蛋白提取实验，保证分离的细胞量就可以满足实验。不建议转染，转染会损伤细胞，对成熟脂肪细胞来说较为困难。

 

9. 成熟脂肪细胞提取的量少，有解决办法吗？

提高成熟脂肪细胞量，主要通过增加组织量，优化消化条件提高细胞活性、得率进行。同时整个过程要尽量缩短时间、减少操作，减小机械、消化损伤。

 

10. 3T3L1细胞长满后自动分化，镜下可以看到脂滴，能当成熟脂肪细胞使用吗？

已经自发分化成熟的脂肪可以使用，混在一起的未分化其他细胞会影响实验效果。成熟脂肪占比超过一定量对实验结果影响会变小，看具体实验需求。

 

11. 为什么复苏后细胞就老化了？

细胞复苏后老化，可能是因为细胞冻存前的状态不佳，以及冻存时的保存活性效果不好，这些都会影响细胞状态。其中冻存损伤影响比较常见。建议控制冻存前状态，控制冻存过程及冻存液确保细胞活率。

 

12. 为什么有脂滴，但是不染色？

这个要仔细观察一下，是否误判，是油滴一般都会染上色，要么染色试剂方法有异常，要么油滴脱落，留下空泡，导致误判。