细胞学堂|神经星形胶质细胞知识盘点

星形胶质细胞（astrocyte，AST），是哺乳动物大脑中体积最大的胶质细胞，占整个胶质细胞的20%~40%。星形胶质细胞在中枢神经系统（central nervous system，CNS）中发挥重要作用，如参与突触形成 、维持细胞内外离子浓度恒定、参与神经递质的传递、形成并维持血脑屏障。

 

本期细胞学堂为您整理了星形胶质细胞细胞的分类、鉴定、原代分离培养步骤及注意事项，帮助大家快速上手、开展实验~

 

Part 01  星形胶质细胞分类

星形胶质细胞（AST）传统分为两种：

01 纤维性AST

多分布在白质，细胞突起细长，分支较少，胞质内含大量胶质丝。组成胶质丝蛋白质称胶质纤维酸性蛋白质(glialf ibrillaryacidicprotein，GFAP)。

 

纤维性星形胶质细胞

02 原浆性AST

多分布在灰质，细胞突起较短粗，分支较多，胞质内胶质较少。

原浆性星形胶质细胞

Part 02  形态和鉴定

普诺赛提取的大鼠神经星形胶质细胞鉴定图

 

GFAP是星形胶质细胞的骨架蛋白。胚胎神经发育早期星形胶质细胞前体的中间丝一般以波形蛋白为主，在星形胶质细胞成熟时波形蛋白的表达水平降低，而GFAP表达增加并贯穿一生，因此，GFAP被公认为星形胶质细胞的特征性标记物。生理情况下脑内少有表达，在病理状态下出现反应性上调，其上调机制尚未完全阐明。^[1]

啮齿动物和人类原生质星形胶质细胞的比较[2]

 

A: 典型的小鼠原生质星形胶质细胞。GFAP，白色。bar=20μm。

B: 相同规模的典型人类原质星形胶质细胞。bar=20μm。

C和D：人原生质星形胶质细胞是小鼠星形胶质细胞的2.55倍。

E: 小鼠原质星形胶质细胞用DiI（白色）和sytox（蓝色）双极标记，显示了星形胶质细胞的完整结构，包括其众多的精细过程。bar=20μm。

F: 人类星形胶质细胞的立体标记显示了定义人类原生质星形胶质细胞的高度复杂的精细过程网络。bar=20μm。^[2]

 

Part 03  原代分离

1、从1-3天的新生鼠大脑组织初步分离细胞；

2、通过0.25%胰酶消化分离脑细胞；

3、获得混合细胞后，经300g离心10min，多次离心减少杂细胞；

4、差速贴壁30min~60min去除成纤维细胞；

5、后续培养换液时多次震荡，持续纯化细胞。

 

Part 04  培养注意事项

星形胶质细胞参考贴壁细胞常规培养方法培养即可，以下为培养时的3个注意事项：

① 可用常规0.25%胰酶消化；

② 可传3代左右，持续传代细胞形态会有少许变化；

③ 营养需求较低，普通培养基亦可生长，添加神经生长因子后更利于形态维持和细胞增殖。