细胞学堂 | 细胞培养中的小黑点，原来是它

提起细胞培养，相信很多老师都遇到过培养液中的“小黑点”，因无法确定它的身份而头痛不已。本期细胞学堂将为大家揭秘这些黑点究竟是什么，帮助您快速上手开展实验。

 

01 血清沉淀 

血清在融解过程中会产生大量的析出物，呈现出小颗粒样的东西，甚至呈纤维样，这是由于血清融解后导致的蛋白、盐类物质的析出。

 

血清融解时混匀 

血清静置融解不混匀，出现黑点

 

显微镜下的血清沉淀物

   

影响因素

通常血清析出物的多少与融解方法有关。通过4℃冰箱解冻和溶解过程持续摇晃混匀，可以有效避免沉淀产生，而37℃静置混匀则会有较多沉淀物析出。

 

处理方法

血清沉淀产生后应离心去除部分沉淀，否则在培养细胞时会看到较多黑点和杂质类物质，影响判断。

 

02 细胞碎片或者分泌物 

在细胞代谢过程中，细胞凋亡后会产生一些分泌物的沉积和碎片物质，在显微镜下呈黑点状。

显微镜下的细胞碎片及分泌物

 

特征

① 细胞碎片大小不均一，会随着培养时间少量增多，但是不会呈倍增的趋势增多；

② 细胞状态差时碎片会较多，状态变好后黑点减少；

③ 细胞分泌物情况根据细胞有区别，有的细胞不产生分泌物，有的细胞会有较多的分泌物，往往是不影响细胞形态和增殖速度。

 

03  外源微生物污染

当细胞被支原体、黑胶虫或者细菌污染时，往往也会产生很多小黑点，尤其是细菌污染的情况出现时，这些小黑点甚至会导致培养液浑浊。

细胞支原体污染，黑点较多

 

细胞加入支原体清除试剂第二天，黑点显著变少

 

如何区分是否为污染？

1、外源微生物污染

支原体和黑胶虫污染一般表现为黑点增多并伴随细胞生长速度变慢、死细胞增多等现象，通常加入对应清除试剂后细胞状态会有显著改善。

2、细胞分泌物/细胞碎片

细胞分泌物和细胞碎片则不会因为加入清除试剂后而改善，会持续存在且不影响细胞增长。