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细胞学堂 | 细胞拉丝的五大常见原因及解决方法
2514 人阅读发布时间：2024-07-12 16:35
通常情况下，细胞在体外培养环境中大多呈现扁平、多角形或圆形等形态，这些细胞形态对于细胞的营养吸收、分裂增殖及物质转运等生理活动至关重要。然而，不少研究者在实际培养过程中会遇到细胞形态异常的问题，尤其是细胞出现“拉丝"现象。这一现象，往往伴随细胞状态变差，对实验结果的准确性及实验进展构成了不容忽视的影响。
本期细胞学堂，我们将为您详细介绍细胞培养过程中出现拉丝现象可能的原因，并针对性提供解决方法，助您细胞培养无忧！
细胞拉丝常见原因及解决方法
拉丝为部分细胞的正常形态
某些细胞株在正常培养过程中，如SH-SY5Y（人神经母细胞瘤细胞）和K7M2 wt（小鼠骨肉瘤成骨细胞），通过光学显微镜观察（如图1和2所示），细胞本身形态就有拉丝和触角状形态，是其正常形态。
图1. SH-SY5Y细胞形态
图2. K7M2 wt细胞形态
解决方法：
在初次培养不熟悉的细胞过程中，若观察到拉丝现象，首先建议参考权威细胞库提供的细胞图片，以鉴别该细胞本身是否具有拉丝的形态特征。对于本身形态就存在拉丝特征的这类细胞，无需针对拉丝现象进行特殊处理。然而，如果经过对比明确细胞本身不具有拉丝的形态特征，且伴随有细胞增殖变慢或其他改变时，那么就需要进一步排查可能的原因。
细胞接种密度过高或过低
细胞接种密度过高时，细胞之间的营养和空间竞争会加剧，这种竞争压力可能导致细胞形态拉丝。若使用无血清培养基培养间充质干细胞，接种密度过低，也可能导致细胞长不起来，细胞形态会逐渐伸长拉丝。
解决方法：
根据细胞的特性，选择合适的接种密度，并定期进行细胞传代，将细胞密度维持在合适范围内。
培养条件不当
如培养基配方错误、培养基中关键营养物质（如氨基酸、维生素、生长因子等）不足、pH值变化、温度波动或气体环境（如CO₂浓度）不适宜，均可能影响细胞正常形态与功能，导致细胞拉丝。
解决方法：
使用新鲜配制的培养基培养细胞；根据细胞的生长情况，及时换液，确保培养过程中营养充足；必要时可尝试提高血清使用浓度（终浓度不超过20%）或更换高品质胎牛血清（如图3所示）。
图3. Renca（小鼠肾癌细胞）细胞形态
操作不当
在处理如贴壁细胞等需要消化的细胞时，解离试剂的选择、消化时间的控制、操作力度的把握等都至关重要。解离试剂选择不当、消化时间过长或操作力度过大等均可能导致细胞受损，进而引发细胞形态改变，出现拉丝现象。
解决方法：
针对不同细胞选择合适的解离试剂，控制消化时间，在消化过程中操作轻柔，最-大程度降低消化过程对细胞的损伤。
细胞污染
在细胞培养的过程中，若出现细菌、真菌、支原体、黑胶虫等污染，其与细胞争夺营养，同时产生有细胞毒性的代谢产物，将会导致细胞状态明显变差，细胞可能出现拉丝现象。
解决方法：
提高细胞培养过程中的无菌操作意识，使用无菌试剂、耗材。对于支原体、黑胶虫等不易察觉的污染，可以定期检测或空培确定是否发生污染。及时发现，及时处理，有效防止污染范围的扩大。
以上就是关于细胞拉丝原因及解决方法的详细解读，更多细胞培养干货，请持续关注细胞学堂专栏~