细胞学堂 | 一次解决CTLL-2细胞培养疑难杂症

1747 人阅读发布时间：2024-09-04 08:59

CTLL-2细胞是一株源自C57BL/6小鼠的具有细胞毒作用的IL-2依赖型的T-细胞株，广泛应用于免疫学和癌症研究中。由于CTLL-2细胞自身特性，在该细胞培养过程中存在细胞冻存复苏后生长静止期长、细胞状态调整时间长、细胞状态易变差等难点。

本期，我们将为大家带来CTLL-2细胞的基本信息介绍以及培养时的注意事项解析，帮助您轻松掌握培养技巧，确保实验顺利进行。

细胞基本信息

细胞名称：

CTLL-2 (小鼠T细胞)

生长特性：

悬浮生长，少量贴壁；细胞较难复苏，复苏后培养初期，细胞呈单颗悬浮生长，同时有很多细胞碎片

细胞培养条件：

RPMI-1640 + 10% FBS + 100 U/mL recombinant IL-2 + 1.0 µg/mL Con A + 1% P/S

细胞冻存条件：

推荐冻存密度5×10⁶ cells/mL，冻存液配方90% FBS + 10% DMSO

传代比例：

推荐传代比例1:2-1:3

细胞培养注意事项

01、营养需求

CTLL-2细胞对营养需求高，因此建议使用优质胎牛血清培养；细胞状态较好时，细胞聚团较大，需注意观察培养基的营养消耗情况，可适当增加换液频次。

02、IL-2依赖性

CTLL-2细胞为IL-2依赖型细胞，实验室培养该细胞时可以常备 IL-2。如果培养CTLL-2细胞过程中发现状态变差，出现散在细胞变多、生长停滞等情况，建议培养基中添加100 U/mL的IL-2，可以改善细胞状态。

03、细胞复苏与状态调整

CTLL-2细胞冻存后再复苏，一般需要2周左右时间来调整状态。

细胞复苏后初期，细胞会呈单颗悬浮生长，并伴有较多的细胞碎片和黑点。在此期间，建议每2-3天进行一次补液或半换液操作，持续培养2-3周，以调整细胞状态。此外，可在培养基中补充100 U/mL的IL-2，以促进细胞生长。

在细胞状态调整过程中，需要特别注意细胞密度的维持。建议将细胞密度控制在1×10⁶ cells/mL左右。如果细胞复苏后密度较低，可以一次多复苏几支，后期调整过程中也可以视情况进行合瓶，以提高细胞培养密度。当细胞开始聚团时，通常意味着细胞状态正在逐步改善。请注意，在状态调整期间，细胞可能基本不生长，待细胞适应后才开始生长，这个过程需要耐心等待。

04、细胞换液和传代

当细胞状态恢复正常，可以选择竖直培养瓶培养细胞，以维持细胞局部较高密度。细胞换液通常采取补液或半换液的方式，换液频率建议为2-3天一次。传代方式可采用直接分瓶或离心分瓶，需要注意的是，CTLL-2细胞不宜频繁离心，若选择离心传代，建议频率控制在一周一次；处理细胞时吹打轻柔，次数不要过多，以免对细胞造成损伤。

05、细胞冻存

在进行CTLL-2细胞冻存时，建议提高冻存密度。冻存时细胞密度不宜低于1×10⁶cells/支，推荐冻存密度5×10⁶ cells/支。