- 移动端
武汉普诺赛生命科技有限公司品牌商
13 年
手机商铺
- NaN
- 0.7000000000000002
- 0.7000000000000002
- 2.7
- 2.7
公司新闻/正文
哺乳动物细胞重组蛋白表达：从培养到纯化的全流程优化策略
305 人阅读发布时间：2025-05-23 13:12
普诺赛直播课
在5月20日普诺赛直播间中，孙老师为大家带来了《哺乳动物细胞重组蛋白表达策略》的专题课程。
直播回放路径
①可在“武汉普诺赛”微信视频号查看；
②B站搜索“普诺赛生物”，点击视频观看学习。
每一份好奇心都是推动科学进步的力量，针对大家在直播中提出的问题，我们特意邀请徐老师为大家进行深入解答。
另外，我们诚挚地欢迎大家在评论区畅所欲言。无论是实验技术问题还是感兴趣的课程主题，我们都将倾听您的每一个意见并积极回应，也会根据大家的需求定制专题讲座。感谢您的参与和关注！
直播问题解答
问：Fed-batch过程中一般如何选择接种密度？
Fed-batch过程中，常用接种密度为0.5-1.0 × 106 cells/mL，如果细胞迟滞期较长，可以通过适当增加接种密度，缩短细胞进入对数生长期的时间。
问：从哪些方面优化可以提高蛋白产量？
对于单克隆细胞株（Monoclonal Cell Line），可通过提高细胞生长密度、优化补料策略以延长细胞生长的平台期，以及提升比生产率（Qp）来进一步增强表达水平和产量。
对于细胞池（Cell Pool），可通过加压筛选高表达单克隆细胞株，实现稳定高效表达。
问：哺乳动物细胞培养中，如何平衡细胞比生长速率（μ）与蛋白比生产速率（Qp）的关系？
在培养初期，通过维持较高比生长速率（μ），例如设定培养温度为37℃、保持培养基中较高的葡萄糖浓度，以促进细胞快速扩增；
进入稳定期后，可适当降低培养温度（如降至33℃）并调整营养供应，使细胞由增殖状态转向高效蛋白表达状态，从而提供产物表达水平。
问：反应器培养工艺哪些可以影响酸峰？
反应器培养过程中，酸峰通常与细胞代谢产物（如乳酸）的积累有关。影响酸峰的工艺因素主要包括温度控制、pH设定值、补料策略、溶氧水平以及搅拌速率等。
其中，适当降低培养温度以及下调pH设定值可有效减少乳酸的过量积累，从而降低酸峰的发生程度。此外，优化碳源类型和供给速度也有助于控制细胞代谢通量，进一步平缓酸峰。
问：CHO瞬转是否需要降温？会带来多大影响？
在CHO瞬时转染过程中，降温通常是一种常见策略，主要用于抑制空载细胞的快速增殖，从而提高目标蛋白的表达效率。
降温对表达水平的提升具有项目依赖性——在某些项目中，降温可显著提升产量，例如从约50 mg/L 提高至300 mg/L；但也存在部分项目中，降温对产量提升效果不明显。
需要注意的是，降低温度可能会减缓蛋白的生成速率，因此通常需适当延长培养时间以实现表达最大化。