细胞污染识别与处理全攻略：5种常见类型+关键误区

在细胞培养过程中，污染是最令人头痛的问题之一。从新手到资深研究员，几乎都遇到过这样的窘境：培养基突然变得浑浊、细胞形态异常、增殖速度减慢，甚至大量细胞死亡——数天的心血瞬间付诸东流。细胞污染一旦发生，通常难以彻底消除，因此预防为主、及时识别、快速判断、果断处理，才是降低损失的关键。

本期细胞学堂将拆解五种最常见的细胞污染类型，并揭示其中易被忽视的关键误区，助您快速识别问题、科学高效应对。

一、细菌污染

细菌污染是细胞培养中最常见、爆发速度最快的污染类型，常见的细菌包括大肠杆菌、金黄se葡萄球菌等。

污染特点：

1. 显微镜下可见黑色细沙状颗粒，部分细菌可能会有明显的定向移动；

2. 细菌多呈球状或杆状，形态较为规则，均匀分布；

3. 爆发速度较快，通常1-2天就能看到明显变化，如培养基变浑浊、pH改变（酚红指示剂颜色异常），可能伴随异味；

4. 细菌大量繁殖会消耗营养、分泌毒素，导致胞内颗粒增多、细胞形态改变、细胞增殖减缓甚至大面积死亡。

预防和补救方法：

1. 定期清洁实验室、培养箱和超净台，严格执行无菌操作规范；

2. 轻度污染时可以尝试用高浓度双抗（如5×或10×）清洗细胞，更换新鲜培养基后继续观察；若培养基明显浑浊或细胞已大面积死亡，建议直接丢弃并进行彻底消杀；

3. 一旦发现污染，立即更换培养基、血清、PBS、胰酶等试剂及耗材，并系统排查潜在污染来源。

图1. 细胞细菌污染典型形态（客户反馈实例）

二、真菌污染

真菌污染主要包括霉菌和酵母菌。相比细菌污染，真菌污染扩散速度略慢、潜伏期更长，但污染范围更广。

污染特点：

1. 早期培养基保持澄清透亮不浑浊，不易察觉，对局部细胞影响较大；

2. 随着污染加重，形成肉眼可见的絮状漂浮物，呈白色或黄色小团，镜下可见链球状、丝状、管状或者树枝状的菌丝；

3. 真菌产生的孢子，可通过空气传播，极易污染其他细胞，甚至蔓延至整个实验室。

预防和补救方法：

1. 维持细胞房相对湿度在40%-60%，实验结束后及时清理废弃物，避免真菌滋生；

2. 真菌污染较难清除且易传播，一旦污染不建议保留，应消杀后丢弃；

3. 真菌污染需对培养箱、超净台和实验室进行全面消杀，确保杀灭真菌孢子。

图2. 细胞真菌污染典型形态（客户反馈实例）

三、支原体污染

支原体是介于细菌与病毒之间、能独立生活的最小微生物，直径仅0.1-0.3 μm，普通光学显微镜无法观察，是细胞培养中最隐蔽的污染类型。

污染特点：

1. 显微镜下可见细胞间隙有不规则黑点，无明显运动；

2. 细胞状态变差、形态改变（呈拉丝样），增殖速度变慢，最终漂浮甚至死亡；

3. 培养基通常保持澄清，无异味。

预防和补救方法：

1. 定期对培养细胞进行支原体检测，常用方法包括PCR法、显色法、荧光染色法等；

2. 若细胞感染支原体后状态尚佳，可使用支原体清除试剂处理，直至检测转阴；若污染严重，则建议消杀后丢弃。

图3. 细胞支原体污染典型形态（客户反馈实例）

四、黑胶虫污染

黑胶虫是一种颇具争议的污染类型，目前尚无明确定义。部分研究者认为其可能是支原体或其他未知的、增殖不明显的微生物污染。普通光学显微镜下难以观察。细胞被黑胶虫污染后，会出现细胞状态变差，间隙黑点增多的现象；且随着培养时间的延长，小黑点会逐渐增多，更换培养液不能将其去除。

预防和补救方法：

若细胞状态尚佳，可尝试使用黑胶虫清除试剂处理，直至细胞恢复稳定；若细胞状态太差，建议消杀后丢弃。

图4. “黑胶虫”污染典型形态

五、细胞交叉污染

细胞交叉污染是指不同种属或不同株系的细胞混入同一个培养体系。部分交叉污染可通过细胞形态的变化进行初步判断，但形态观察不可靠，必须经过实验验证。

鉴定和处理方法：

1. 同种属细胞鉴定：采用STR鉴定。若检测结果显示多等位基因数大于3个及以上，可考虑有交叉污染可能。需结合细胞本身的遗传背景，如EA.hy 926为融合细胞，本身就包含两套遗传信息；

2. 不同种属细胞鉴定：采用PCR法对种属特异性基因进行扩增，通过产物大小差异进行区分；

3. 处理方式：若确定细胞发生交叉污染，建议重新引种细胞。

图5. 细胞交叉污染典型形态（客户反馈实例）

六、关键误区：“黑点”≠污染

很多人一看到显微镜下的“黑点”就认定是污染，其实“黑点”不一定就是污染。以下情况也可能出现“黑点”，属于正常现象：

1. 细胞代谢产物：部分细胞在生长过程中会产生分泌物颗粒，这种是细胞生长过程中的正常生理代谢现象，可通过换液去掉。

2. 细胞碎片：在细胞培养过程中，强烈的物理刺激，比如贴壁细胞消化过程中未消化完全，就大力拍打器皿壁或者用移液枪将细胞吹下来，对细胞造成机械损伤，导致细胞碎裂产生碎片。

3. 血清沉淀：血清中磷酸钙、纤维蛋白等在低温储存或反复冻融后会形成沉淀，不影响细胞的正常生长。

4. 凋亡小体：培养环境改变可能会诱导细胞凋亡，形成凋亡小体，所以在培养细胞的过程中，尽量避免频繁更换培养试剂，维持环境稳定。

因此，判断细胞是否被污染，应结合细胞生长状态、形态变化、培养体系特征及镜下表现等综合分析，避免过度焦虑和误判。

以上就是关于细胞常见污染类型、识别要点及预防措施的全部内容，帮助大家在细胞培养中远离污染困扰，实验顺利进行。

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