HCT 116（人结肠癌细胞）：结直肠癌研究领域的经典模型

在免疫学与肿瘤免疫治疗领域，树突状细胞（Dendritic Cells, DC）作为最强大的抗原提呈细胞，一直是研究热点。然而，原代DC细胞在体外获取难、增殖慢且难以长期维持，限制了相关研究的推进。DC2.4细胞系作为一株永生化的小鼠骨髓来源树突状细胞，恰好为科研工作者提供了一个稳定、便捷且功能完备的体外模型。

细胞概述：源自骨髓的永生化DC模型

DC2.4细胞系通过逆转录病毒载体转导C57BL/6小鼠骨髓细胞，引入表达小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）以及myc和raf癌基因而构建，成功实现了树突状细胞的永生化。该细胞系保留了原代DC的关键特征，包括典型的树突状形态（圆形、梭形，并带有分枝状胞突）以及表达DC特异性表面标记物的能力。尤为重要的是，DC2.4具备吞噬并提呈抗原至MHC I类和II类分子的功能，这使其成为研究T细胞激活与免疫应答机制的有力工具。

来源与背景：C57BL/6小鼠骨髓来源

• 种属：小鼠（C57BL/6背景）

• 组织来源：骨髓

• 细胞类型：转化细胞系（永生化）

• 生物安全等级：BSL-1

• RRID：CVCL_J409

DC2.4在常规培养条件下呈现未成熟DC的表型，即MHC II类及共刺激分子（如CD80、CD86）表达水平较低。这一特性使其成为筛选和评估DC成熟诱导剂（如细胞因子、TLR激动剂等）的理想模型。研究表明，经IFN-γ等刺激后，DC2.4可显著上调CD80、CD86及MHC II类分子表达，并分泌IL-6、IL-12和TNF-α等细胞因子，模拟DC成熟过程。

培养条件表

特别提示：该细胞为贴壁生长，但少量细胞会悬浮。当细胞密度较低时，悬浮细胞较少；密度较高时，悬浮比例会增加。传代操作时，建议先收集培养基中的悬浮细胞，离心后与胰酶消化的贴壁细胞合并，再进行传代。贴壁细胞消化时间可能较长，亦可采用无菌细胞刮辅助收集。

复苏和传代方法

1. 细胞复苏

• 将冻存管在37℃水浴中快速解冻（约1-2分钟）。

• 将细胞悬液转移至含4-6 mL预温完全培养基的离心管中，混合均匀。

• 1000 rpm离心3-5分钟，弃上清。

• 用完全培养基重悬细胞，转移至培养瓶，置于37℃、5% CO₂培养箱中培养。

• 次日观察细胞贴壁及生长状态。

2. 细胞传代

• 当细胞密度达到80%-90%时进行传代。

• 关键步骤：先收集培养瓶中的悬浮细胞，300g离心5分钟，保留沉淀。

• 用PBS润洗贴壁细胞1-2次。

• 加入0.25%胰酶-EDTA于37℃消化1-3分钟，显微镜下观察细胞变圆脱落。

• 加入含血清培养基终止消化，轻轻吹打瓶壁，收集细胞悬液。

• 将胰酶消化的细胞与之前收集的悬浮细胞合并，1000 rpm离心3-5分钟。

• 弃上清，用新鲜完全培养基重悬，按1:2至1:4比例接种到新培养瓶中。

• 补充足量培养基，继续培养。

3. 细胞冻存

• 推荐使用无血清非程序冻存液（如Procell PB180438）或经典配方：90% FBS + 10% DMSO。

• 收集细胞（处理方法同传代），计数后以推荐密度（如1×10⁶ cells/mL）重悬于冻存液中。

• 分装至冻存管，放入程序降温盒或直接置于-80℃冰箱过夜，次日转入液氮罐长期保存。

质量检测：STR鉴定与支原体检测

为确保实验数据的可重复性和可靠性，使用明确鉴定且无污染的细胞系至关重要。

• STR鉴定：DC2.4细胞系已通过短串联重复序列（STR）分型鉴定，确认为小鼠细胞系，且STR鉴定正确。关键位点信息（以Millipore数据为例）包括：1-1 (17), 1-2 (19), 2-1 (16), 3-2 (14), 4-2 (20.3, 21.3), 5-5 (17), 6-4 (18), 6-7 (17), 7-1 (26.2, 27.2), 8-1 (16), 11-2 (16), 12-1 (17), 13-1 (17.1), 15-3 (22.3, 23.3), 17-2 (16), 18-3 (16), 19-2 (13), X-1 (27)。不同供应商数据可能存在微小差异，但均属同一细胞系。

• 支原体检测：该细胞系经过严格检测，支原体结果为阴性。

适用实验

普诺赛DC2.4（小鼠骨髓来源树突状细胞）因其稳定性和功能性，广泛适用于以下研究方向：

• 树突状细胞生物学：研究DC分化、成熟、迁移及抗原提呈的分子机制。

• 肿瘤免疫治疗：用于开发基于DC的肿瘤疫苗，评估肿瘤微环境对DC功能的影响，以及筛选免疫检查点抑制剂等。

• 疫苗佐剂评估：通过检测DC2.4表面共刺激分子（CD80/CD86）上调和细胞因子分泌，高通量筛选新型疫苗佐剂。

• 宿主-病原体互作：研究病原体（如弓形虫）或其组分对DC信号通路和免疫功能的影响。

• 基因功能研究：通过转染过表达或敲低特定基因（如转录因子Hlx），观察其对DC功能的影响。

运输和保存

普诺赛DC2.4（小鼠骨髓来源树突状细胞）提供两种运输形式，用户可根据实验室条件选择：

1. 常温运输（活细胞）：细胞培养于T25瓶中，充满培养基常温寄送。收到后请立即处理，建议换用新鲜完全培养基继续培养。

2. 冻存运输：提供2管冻存细胞（1×10⁶ cells/管），置于干冰中运输。收到后请立即转移至-80℃冰箱（可短期存放）或液氮罐中（长期保存）。

常见问题（FAQ）

Q1: 如何有效去除培养体系中的死细胞和碎片？
A: 推荐采用低速离心法（800 rpm，离心3分钟）。活细胞因密度较大沉淀于管底，而死细胞和碎片较轻，大部分会残留于上清中。此方法可去除大部分死细胞，但无法完全清除。

Q2: 刚购买的细胞应该如何进行保种？
A: 建议收到细胞后，先扩增培养1-2代。随后冻存1-2管作为种子库，一周后复苏一管以验证细胞活力和冻存条件。确认无误后，可进行批量冻存。

Q3: 可能导致DC2.4细胞状态不佳或死亡的原因有哪些？
A: 常见原因包括：培养箱CO₂浓度不准、温度波动、湿度不足（需保持水盘有水）、培养基渗透压不正确（范围260-350 mOsm/kg）、微生物污染（支原体污染隐蔽，需定期检测）、使用不当或过期培养基等。

Q4: 为什么文献中使用的培养条件与官网推荐的不同？
A: 部分细胞系确实存在多种可用的培养条件。供应商通常优先采用引种来源或建系者使用的原始条件。若您的细胞来源不同，建议先使用供应商推荐的体系进行培养，待细胞稳定后再尝试更换，避免因条件突变导致细胞不适应。

Q5: DC2.4细胞的表面标志物表达是否稳定？
A: DC2.4在长期传代过程中，其表面标志物（如CD11c, CD80, CD86）的表达水平可能发生漂移。强烈建议在关键实验前，通过流式细胞术等标准方法对您手中的细胞株进行表型验证，以确保其符合特定实验需求。

文献引用（IF排名前5）

普诺赛DC2.4（小鼠骨髓来源树突状细胞）已被广泛应用于高水平研究，以下为引用该细胞系的部分代表性文献（按影响因子排序）：

1. 期刊：Bioactive Materials (影响因子: 23.6)

2. 期刊：ADVANCED FUNCTIONAL MATERIALS (影响因子: 19.0)

3. 期刊：CARBOHYDRATE POLYMERS (影响因子: 12.5)

4. 期刊：JOURNAL OF CONTROLLED RELEASE (影响因子: 11.5)

5. 期刊：Materials Today Bio (影响因子: 10.2)

（更多引用文献列表请参考原始产品页面）

总结

普诺赛DC2.4（小鼠骨髓来源树突状细胞）是一株经过STR鉴定、背景清晰、功能完备的小鼠永生化树突状细胞。它有效解决了原代DC细胞来源稀缺、难以培养的难题，为树突状细胞生物学、肿瘤免疫、疫苗开发及病原体免疫逃逸等前沿研究提供了稳定、高效的实验平台。其明确的培养条件、特征性的“贴壁+悬浮”混合生长模式，以及丰富的文献引用，均证明其是免疫学研究领域中经过验证的可靠工具。