ECV-304被证实污染后，普诺赛PUMC-HUVEC-T1（SV40T转化人脐静脉内皮细胞）或成血管研究新选择

在血管生物学研究和药物开发领域，寻找一个既保持内皮细胞特性又能稳定传代的细胞模型一直是科研人员面临的挑战。今天，我们将介绍一款在国内自主研发的SV40T转化人脐静脉内皮细胞系——普诺赛PUMC-HUVEC-T1（SV40T转化人脐静脉内皮细胞）(STR鉴定正确)，它可能成为你血管相关研究的理想工具。

背景介绍

血管内皮细胞是覆盖在血管内表面的单层细胞，在维持血管稳态、调节血管张力、控制物质交换以及参与炎症反应和血管生成等过程中发挥着关键作用。长期以来，科研人员主要依靠原代人脐静脉内皮细胞（HUVEC）进行血管生物学研究，但原代细胞存在传代次数有限、难以满足长期实验需求的局限性。

更为棘手的是，曾广泛使用的“人脐静脉内皮细胞”ECV-304，经STR检测分析证明实际为膀胱癌细胞T24所污染，已不能作为血管内皮的模型进行有关心血管生理、生化、疾病及药物的研究。

为解决这一难题，中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心通过感染SV40的大T和小T抗原，建立了可体外连续传代的人脐静脉内皮细胞系PUMC-HUVEC-T1。

产品介绍

生长特性与细胞形态

PUMC-HUVEC-T1表现出典型的内皮细胞样形态，细胞呈扁平多角状，汇合时呈现典型的鹅卵石样排列。该细胞为贴壁生长类型，已证明在体外可传至40代以上，传代比例推荐为1：3～1：4。

培养方案

PUMC-HUVEC-T1的推荐培养条件为：使用DMEM高糖培养基（含4.5g/L葡萄糖） supplemented with 10%胎牛血清（FBS）和1%非必需氨基酸（NEAA）。培养环境为37℃、5% CO₂、95%空气的培养箱。传代频率建议为一周1～2次，使用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液消化1-2分钟。

冻存条件可使用基础培养基+8%DMSO+20%FBS或90%FBS+10%DMSO的冻存液，长期保存应置于液氮中。

组织来源与细胞类型

PUMC-HUVEC-T1来源于人脐带脐静脉血管内皮组织，种属为人源性，性别为女性（XX染色体）。该细胞系属于转化细胞系，通过SV40 T抗原转化获得永生化特性，但保持了血管内皮细胞的基本特性。

检测原理

普诺赛PUMC-HUVEC-T1（SV40T转化人脐静脉内皮细胞）鉴定采用了多种方法：

• 内皮标记物检测：免疫细胞化学检测显示，该细胞系内皮标记vWF、CD31、CD34均呈阳性表达，并具有结合凝集素（如荆豆凝集素-1）的能力。
• 超微结构分析：透射电镜观察可见细胞具有紧密连接和W-P小体（Weibel-Palade小体），这是内皮细胞的典型超微结构特征。
• 功能特性验证：在Matrigel基质胶上，PUMC-HUVEC-T1能够形成管型结构，模拟血管生成过程。
• 遗传稳定性评估：不同代数的PUMC-HUVEC-T1细胞核型保持正常稳定（P12、P13、P19、P38），裸鼠体内接种不成瘤（P9和P33），表明其不具有致瘤性。
• 身份鉴定：STR分析结果显示PUMC-HUVEC-T1与原代HUVEC一致，种属鉴定为人源性，且无支原体污染。

应用领域

普诺赛PUMC-HUVEC-T1（SV40T转化人脐静脉内皮细胞）在多个研究领域具有广泛应用前景：

• 血管生物学研究：用于研究血管生成、血管功能以及血管相关疾病如动脉粥样硬化、高血压等的病理机制。
• 药物筛选与评价：在血管相关药物筛选中应用广泛，可评估药物对血管内皮细胞的影响，特别是在抗血管生成治疗药物的研发中。
• 基因功能研究：利用该细胞系进行血管相关基因的表达与功能验证，评估特定基因对血管生成的作用。
• 细胞迁移与血管生成实验：通过划痕实验或Transwell实验研究内皮细胞的迁移能力，分析药物或基因突变对迁移的影响。
• 内皮-间质转化（EndMT）研究：有研究使用PUMC-HUVEC-T1细胞探索CXCL8如何通过CXCR2促进内皮细胞发生EndMT。

产品优势

普诺赛PUMC-HUVEC-T1（SV40T转化人脐静脉内皮细胞）具有多方面优势：

• 可靠的来源与背景：作为国内自主研发的细胞系，PUMC-HUVEC-T1背景清晰，经过严格的质量控制，包括STR鉴定、支原体检测和种属鉴定等。
• 保持内皮细胞特性：尽管经过SV40 T抗原转化，该细胞系仍保留了内皮细胞的基本特性，包括形态、标记物表达和功能特性。
• 稳定的传代能力：相比原代HUVEC，PUMC-HUVEC-T1具有更强的增殖能力和更长的传代寿命，可满足长期实验需求。
• 替代污染细胞系的理想选择：与ECV-304等已被证明污染的细胞系相比，PUMC-HUVEC-T1具有更高的可靠性和应用价值。
• 已获多项科研项目支持：截至2014年9月，PUMC-HUVEC-T1已支持包括863、973和国家重大专项4项，国家自然科学基金24项在内的多项科研项目。

文献引用

PUMC-HUVEC-T1细胞系已被多项研究引用，以下是部分代表性文献：

1. 冯海凉， 王春景， 顾蓓， 等. 猿猴病毒40 T抗原转化的人脐静脉内皮细胞系PUMC-HUVEC-T1的建立[J]. 解剖学报， 2013, 44(2): 199-203. 

2. 一项发表于《Molecular and Cellular Biochemistry》(2023)的研究，使用PUMC-HUVEC-T1细胞探索缺氧预处理的骨髓间充质干细胞来源的细胞外囊泡通过递送miR-34c改善下肢缺血的作用机制。该期刊影响因子为4.3。

3. 一项发表于《Pharmaceuticals》(2023)的研究，使用PUMC-HUVEC-T1细胞研究CXCL8通过CXCR2促进内皮细胞发生内皮-间质转化(EndMT)的机制。

总结

普诺赛PUMC-HUVEC-T1（SV40T转化人脐静脉内皮细胞）作为一款国内自主研发的SV40T转化人脐静脉内皮细胞系，既克服了原代HUVEC传代有限的缺点，又保持了血管内皮细胞的基本特性。与已被污染的ECV-304等细胞系相比，它具有更高的可靠性和应用价值。随着血管生物学和心血管疾病研究的不断深入，PUMC-HUVEC-T1有望成为内皮细胞研究领域的重要工具，为血管相关疾病的机制探索和药物研发提供有力支持。