一、   程序冻存步骤（需梯度降温）
1、 配置冻存液，冻存液推荐配比：55%（基础培养基）+40%(血清)+5%（DMSO）或90%胎牛血清+10%DMSO；推荐使用Procell通用血清型程序冻存液，货号PB180436；
2、 制备好的细胞悬液计数，计算总细胞量；
3、 细胞离心后尽量吸干净上清，离心转速1200rpm（250g）3min；
4、 加入配置好的冻存液重悬，调整细胞浓度为3×10⁶~1×10⁷cells/mL；
5、 分装入冻存管，一个冻存管分装1~1.5毫升；
6、 推荐使用程序降温盒，分装好的冻存管转入程序降温盒后直接放入-80℃冰箱过夜；
7、 如没有程序降温盒，则按下列顺序依次降温：室温→4℃ 20min→-20℃ 30min→-80℃过夜→液氮保存，注意转移过程中要保冷，避免产生温差或冻存管融化；
8、 从-80℃冰箱取出冻存管迅速转移到液氮长期保存。
 
注意事项：
1、 DMSO配制的时候会放热，一定要等冻存液冷却后使用，避免灼伤细胞；
2、 细胞离心后尽量吸干净上清液，减少培养基残留，避免稀释冻存液；
3、 不建议手动梯度降温，温度不稳定，容易降低存活率；
4、 注意程序降温盒内异丙醇的量必须高于最低刻度线；冻存5次后异丙醇需要更换一次，以免影响冻存效果；程序降温盒需恢复到室温以后才能继续使用，不能从冰箱拿出来直接使用；
5、 细胞悬液加入冻存液以后尽量短时间的在常温放置，DMSO常温下对细胞损伤大，分装完成后立即转入程序降温盒放到-80度冰箱，不需要放4度；
6、 -80度冻存过夜后可以转入液氮长期保存，转入液氮的过程需要对冻存盒进行保冷，不要长时间在常温暴露，避免冻存管融化；
7、 若没有液氮罐，存放在-80度的时候一定要放靠里面的位置，避免开关冰箱导致温度不稳定。
8、 细胞冻存后应取出一管复苏，检测细胞的存活率。理论上细胞可在液氮内长期保存，为稳妥起见可在细胞冻存半年后复苏培养，观察细胞生长情况，再继续冻存；
 
二、   非程序冻存步骤（需使用无血清冻存液）
1、  冻存液丛冰箱提前拿出回温到室温，推荐Procell无血清非程序冻存液，货号PB180438；
2、  制备好的细胞悬液计数，计算总细胞量；
3、  细胞离心后尽量吸干净上清，离心转速1200rpm（250g）3min；
4、  加入无血清非程序冻存液（PB180438）重悬，调整细胞浓度为3×10⁶~1×10⁷cells/mL；
5、  分装入冻存管，一个冻存管分装1~1.5毫升；
6、  分装好的冻存管直接转入-80度冰箱过夜，不需要程序降温盒；
7、  转入液氮途中需将冻存管做好保冷措施，避免直接暴露于常温，快速转入液氮罐进行长期保存；
 
注意事项：
1、 由于没有使用冻存盒，在转入液氮的过程中一定要对冻存管做好保冷措施，不能直接用手拿，可以用干冰或者少量液氮保护后转移，操作过程注意安全；
2、 转移过程要快，避免冻存管暴露于常温后融化；
3、 若没有液氮罐，存放在-80度冰箱的时候一定要放靠里面的位置，避免开关冰箱导致温度不稳定；