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技术资料/正文
细胞复苏步骤及注意事项
12714 人阅读发布时间：2022-05-09 13:35
细胞复苏步骤
1、 将水浴锅预热至37℃，准备好干净的一次性PE手套，一个无菌离心管内加入9ml无菌培养基；
2、 将细胞从液氮罐中取出放入PE手套中，迅速没入水浴锅，摇晃冻存管加速溶解，以1分钟内全部溶解为宜；
3、 在超净台中将复苏好的细胞液加入到装有新鲜培养基的离心管内，1200rpm/min 离心3分钟，离心完毕去掉上清；
4、 用适量与细胞对映的完全培养基重悬细胞，接入到无菌容器中（培养瓶或培养皿），补充培养基到适宜，放入培养箱培养；
注意事项：
1、 水浴锅的位置如果与液氮罐不是一个房间，需要对冻存管进行保冷后转移到水浴锅旁，避免路途细胞表面融化；
2、 细胞溶解过程快速摇晃以加速溶解；
3、 已溶解的冻存细胞尽量短时间的在常温存放，尽快离心去除DMSO；
4、 贴壁细胞复苏24小时后观察，若密度达到80%，则正常传代；若密度不到80%则继续培养到48小时再换液；
5、 悬浮细胞复苏3天内不建议离心换液；
6、 对DMSO不敏感的细胞在复苏时也可不离心，减少操作步骤，也可降低污染的几率。将解冻的细胞悬液直接转移至T25细胞瓶内，补加新鲜培养基，放入温箱内培养。但培养12~24h后必须换新鲜的培养基，移除死细胞。
1、 将水浴锅预热至37℃，准备好干净的一次性PE手套，一个无菌离心管内加入9ml无菌培养基；
2、 将细胞从液氮罐中取出放入PE手套中，迅速没入水浴锅，摇晃冻存管加速溶解，以1分钟内全部溶解为宜；
3、 在超净台中将复苏好的细胞液加入到装有新鲜培养基的离心管内，1200rpm/min 离心3分钟，离心完毕去掉上清；
4、 用适量与细胞对映的完全培养基重悬细胞，接入到无菌容器中（培养瓶或培养皿），补充培养基到适宜，放入培养箱培养；
注意事项：
1、 水浴锅的位置如果与液氮罐不是一个房间，需要对冻存管进行保冷后转移到水浴锅旁，避免路途细胞表面融化；
2、 细胞溶解过程快速摇晃以加速溶解；
3、 已溶解的冻存细胞尽量短时间的在常温存放，尽快离心去除DMSO；
4、 贴壁细胞复苏24小时后观察，若密度达到80%，则正常传代；若密度不到80%则继续培养到48小时再换液；
5、 悬浮细胞复苏3天内不建议离心换液；
6、 对DMSO不敏感的细胞在复苏时也可不离心，减少操作步骤，也可降低污染的几率。将解冻的细胞悬液直接转移至T25细胞瓶内，补加新鲜培养基，放入温箱内培养。但培养12~24h后必须换新鲜的培养基，移除死细胞。