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研选
RAW 264.7细胞 (小鼠单核巨噬细胞白血病细胞) (STR鉴定正确)
￥1600
公司新闻/正文
细胞学堂 | RAW 264.7诱导极化及鉴定大全
2846 人阅读发布时间：2023-02-03 13:30
RAW 264.7（小鼠单核巨噬细胞白血病细胞）是破骨细胞、炎症研究最常用的体外模型之一，被广泛用于研究风湿性关节炎、骨质疏松症、骨质溶解、牙周炎等骨骼疾病。
极化方式
巨噬细胞是具有异质性的一类免疫细胞，在体内外不同环境影响下可极化为不同表型参与机体生理、病理反应。从激活方式上分为经典激活的巨噬细胞M1和选择性激活的巨噬细胞M2。
1
M1型分化
细菌和脂多糖（LPS）可以诱导巨噬细胞向M1型分化，产生促炎细胞因子，抵抗病原入侵，但也会造成机体损伤，在实验中可采用2.5ng/mL IFN-γ和200ng/mL LPS共同作用12小时诱导其极化；
图1. a.RAW 264.7 未分化形态图 b.RAW 264.7 M1型分化形态图
2
M2型分化
白细胞介素（IL-4）可以诱导巨噬细胞向M2型分化，分泌抗炎细胞因子，并在组织修复与重建和肿瘤的形成过程中发挥作用，在实验中可采用10ng/mL IL-4作用12小时诱导其极化。
图2. RAW 264.7 不同分型形态图
鉴定方法
M1、M2具有各自特征性标志分子，iNOS、CD86、TNF-α是常见的M1型巨噬细胞的标志分子，IL-10、Arg-1、CD206是常见的M2型巨噬细胞标志分子。一般在实验研究中：
1
WB可以分析RAW264.7细胞iNOS、YM-1和Arg-1的表达水平（如图3）；
图3. WB分析照射对IL-4诱导的RAW264.7细胞YM-1和Arg-1的表达影响
2
流式细胞术（FCM）可以分析RAW264.7细胞表面CD86和CD206的表达（如图4）；
图4. 流式细胞术分析照射对IL-4诱导的小鼠RAW264.7细胞CD206和CD209的表达
3
实时定量 PCR 和 ELISA 可以分析IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-12 及 IL-10 等细胞因子的表达及分泌(如图5）；
图5. 用于实时荧光定量PCR的引物序列
4
Griess reagent 可以分析细胞培养上清 NO 生成（如图6）。
图6. 不同样品对RAW 264.7中NO产生的影响
参考文献
[1] 罗进芳, 朱瑞丽, 易浪,等. 青藤碱对LPS、IL-4诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞极化的影响[J]. 中国免疫学杂志, 2015, 31(1):5.
[2] 陈涛, 梁潇, 贺明,等. RAW264.7细胞M1/M2亚型的诱导和鉴定[J]. 中国分子心脏病学杂志, 2011(2):4.
[3] 解海荣, 李贞, 李海亮 ,等. 不同照射方式对IL-4诱导的小鼠RAW264.7细胞极化的影响. 中国辐射卫生, 2017, 26(6): 637-641.
[4] Li C, Du Y, Lv H, et al. Injectable Amphipathic Artesunate Prodrug-Hydrogel Microsphere as Gene/Drug Nano-Microplex for Rheumatoid Arthritis Therapy[J]. Adv. Funct. Mater. 2022, 32, 2206261.
[5] Li P , Hao Z , Wu J , et al. Comparative Proteomic Analysis of Polarized Human THP-1 and Mouse RAW264.7 Macrophages[J]. Frontiers in Immunology, 2021, 12:700009.
[6] Ji-Eun Lee, Jae Hoon Lee, Byungrok Min,et al. Immunostimulatory effect of egg yolk phosvitin phosphopeptides produced by high-temperature and mild-pressure pretreatment and enzyme combinations in RAW 264.7 cells via TLR2/MAPK signaling pathway[J].Journal of Functional Foods，Volume 98，2022，105264.
极化方式
巨噬细胞是具有异质性的一类免疫细胞，在体内外不同环境影响下可极化为不同表型参与机体生理、病理反应。从激活方式上分为经典激活的巨噬细胞M1和选择性激活的巨噬细胞M2。
1
M1型分化
细菌和脂多糖（LPS）可以诱导巨噬细胞向M1型分化，产生促炎细胞因子，抵抗病原入侵，但也会造成机体损伤，在实验中可采用2.5ng/mL IFN-γ和200ng/mL LPS共同作用12小时诱导其极化；
图1. a.RAW 264.7 未分化形态图 b.RAW 264.7 M1型分化形态图
2
M2型分化
白细胞介素（IL-4）可以诱导巨噬细胞向M2型分化，分泌抗炎细胞因子，并在组织修复与重建和肿瘤的形成过程中发挥作用，在实验中可采用10ng/mL IL-4作用12小时诱导其极化。
图2. RAW 264.7 不同分型形态图
鉴定方法
M1、M2具有各自特征性标志分子，iNOS、CD86、TNF-α是常见的M1型巨噬细胞的标志分子，IL-10、Arg-1、CD206是常见的M2型巨噬细胞标志分子。一般在实验研究中：
1
WB可以分析RAW264.7细胞iNOS、YM-1和Arg-1的表达水平（如图3）；
图3. WB分析照射对IL-4诱导的RAW264.7细胞YM-1和Arg-1的表达影响
2
流式细胞术（FCM）可以分析RAW264.7细胞表面CD86和CD206的表达（如图4）；
图4. 流式细胞术分析照射对IL-4诱导的小鼠RAW264.7细胞CD206和CD209的表达
3
实时定量 PCR 和 ELISA 可以分析IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-12 及 IL-10 等细胞因子的表达及分泌(如图5）；
图5. 用于实时荧光定量PCR的引物序列
4
Griess reagent 可以分析细胞培养上清 NO 生成（如图6）。
图6. 不同样品对RAW 264.7中NO产生的影响
参考文献
[1] 罗进芳, 朱瑞丽, 易浪,等. 青藤碱对LPS、IL-4诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞极化的影响[J]. 中国免疫学杂志, 2015, 31(1):5.
[2] 陈涛, 梁潇, 贺明,等. RAW264.7细胞M1/M2亚型的诱导和鉴定[J]. 中国分子心脏病学杂志, 2011(2):4.
[3] 解海荣, 李贞, 李海亮 ,等. 不同照射方式对IL-4诱导的小鼠RAW264.7细胞极化的影响. 中国辐射卫生, 2017, 26(6): 637-641.
[4] Li C, Du Y, Lv H, et al. Injectable Amphipathic Artesunate Prodrug-Hydrogel Microsphere as Gene/Drug Nano-Microplex for Rheumatoid Arthritis Therapy[J]. Adv. Funct. Mater. 2022, 32, 2206261.
[5] Li P , Hao Z , Wu J , et al. Comparative Proteomic Analysis of Polarized Human THP-1 and Mouse RAW264.7 Macrophages[J]. Frontiers in Immunology, 2021, 12:700009.
[6] Ji-Eun Lee, Jae Hoon Lee, Byungrok Min,et al. Immunostimulatory effect of egg yolk phosvitin phosphopeptides produced by high-temperature and mild-pressure pretreatment and enzyme combinations in RAW 264.7 cells via TLR2/MAPK signaling pathway[J].Journal of Functional Foods，Volume 98，2022，105264.