MDA-MB-231细胞培养指南：三阴性乳腺癌细胞特性与培养方法

MDA-MB-231细胞是一种典型的三阴性乳腺癌（TNBC）细胞，归类为claudin-low分子亚型。该细胞特点是缺乏雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和HER2表达，同时表现出上皮-间质转化（EMT）特性、CD44+/CD24-癌症干细胞表型，以及关键突变如TP53- R280K和KRAS-G13D。

MDA-MB-231细胞具有高侵袭性和转移性，是构建动物移植瘤模型、研究乳腺癌侵袭转移机制以及进行靶向药物筛选的重要工具。

本期细胞学堂将详细介绍MDA-MB-231细胞及其培养要点，助您快速开展细胞实验。

一. 基本信息

种属来源：人

组织来源：乳腺腺癌，转移性胸膜渗出液

成瘤属性：在裸鼠和ALS（抗淋巴细胞血清）处理的BALB/c小鼠中，能形成低分化腺癌（III级）

生长特性：贴壁细胞

细胞形态：上皮细胞样

冻存条件：冻存液（55% 基础培养基+40% 胎牛血清+5% DMSO）

冻存温度：液氮

 

二、细胞培养概览

1、生长特性

• MDA-MB-231细胞生长速度较慢，通常按照1:2-1:4的比例进行传代，需要4-6天才能再次传代。

• 培养过程中，细胞会出现少量漂浮和圆形细胞，表面伴有黑色颗粒物，属于正常现象，无需特殊处理。

• 这类细胞本身并不难养，但需要一定的耐心，避免频繁将细胞拿出观察，以免造成温度波动，从而影响细胞状态。

2、培养基选择与体系分析

根据实验条件，可选择以下两种培养方案：

方案一：原始培养体系Leibovitz's L-15 培养基

生长培养基	培养条件	其他
Leibovitz's L-15 +10% 胎牛血清 +1% 青霉素-链霉素溶液（双抗）	气相：空气100%； 温度：37℃； 无需CO₂培养箱。	推荐传代比例：1:2-1:4 推荐换液频率： 2-3次/周

 

方案二：常规替代体系DMEM 培养基

生长培养基	培养条件	其他
DMEM +10% 胎牛血清+1% 青霉素-链霉素溶液（双抗）	气相：空气95%，CO2，5%； 温度：37℃； 适用CO₂培养箱。	推荐传代比例：1:2-1:4 推荐换液频率： 2-3次/周

3、培养基的特点

1）Leibovitz's L-15 培养基特点

• Leibovitz's L-15 培养基缓冲体系主要依赖磷酸盐二级解离反应（ H₂PO₄⁻⇌ H⁺+ HPO₄^2-），其中KH₂PO₄和Na₂HPO₄是核心成分，无需外源CO₂ 即可维持pH 稳定。

• Leibovitz's L-15 培养基若在常规CO₂培养箱中使用，高浓度的CO₂溶于培养基会引起酸化，导致pH值下降，呈黄色（酚红做指示剂），对细胞产生毒性。

• 除磷酸盐外，Leibovitz's L-15 培养基还含有高浓度的氨基酸，特别是缓冲能力较强的甘氨酸和组氨酸等，也能提供一定程度的缓冲能力。

• 为了简化操作，普诺赛^®推出了MDA-MB-231细胞专用培养基（L15），已添加血清和双抗，开盖即可使用，更加方便。

2）DMEM培养基特点

• DMEM依赖NaHCO₃缓冲体系：细胞代谢产生酸性物质会与培养基中的NaHCO₃反应，释放CO₂（CO₂ + H₂O  ⇌ H₂CO₃ ⇌ H⁺ + HCO₃-），从而维持培养基pH值相对稳定。该体系需要一定浓度的CO₂才能平衡。

• DMEM需在 5% CO₂培养箱中使用，适配多数实验室常规培养设备。

• 普诺赛^®推出了MDA-MB-231细胞专用培养基（DMEM），已添加血清和双抗，开盖即可直接使用。

4、细胞培养实例

将MDA-MB-231细胞分别用Leibovitz's L-15、DMEM培养基培养，细胞在形态、特性及传代时间和比例上基本一致（图1）。因此，可根据实验室的培养条件灵活选择合适的体系。

图1. MDA-MB-231 在不同培养基下培养（左：Leibovitz's L-15；右：DMEM  ）

以上是关于MDA-MB-231细胞特性及培养要点的详解介绍，掌握其培养技巧，不仅有助于乳腺癌机制研究，更为药物开发和肿瘤模型构建打下坚实基础。更多细胞培养干货，请持续关注细胞学堂专栏~

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货号	产品名称	规格
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