MCF 10A细胞培养攻略-从特性解析到实操小技巧

MCF 10A是乳腺癌研究领域的里程碑，其凭借自发永生化与非致瘤特性，成为探索乳腺生理与癌变机制的黄金工具。

本期细胞学堂将带您认识MCF 10A细胞并掌握培养要点，助您快速上手，顺利开展实验。

一. MCF 10A细胞简介

MCF 10A细胞是由Herbert D. Soule团队于1984年在密歇根癌症基金会（Michigan Cancer Foundation）建立的人正常乳腺上皮细胞系。其来源是通过皮下乳房切除术从一名36岁女性患者获取的良性纤维囊性乳腺组织，该组织被命名为MCF-10M，包含致密基质和实质。经过处理后，从该组织中分离出上皮细胞并进行原代培养。

在不同钙浓度的培养条件下，MCF-10M衍生出了两个永生化亚型：

• MCF 10A：上皮样单层贴壁，呈鹅卵石状排列，用于模拟正常乳腺上皮细胞及研究癌变早期过程。

• MCF 10F：悬浮呈簇状生长，适用于研究转移相关的锚定非依赖性细胞生长特性。

两类细胞的永生化均由特异性染色体易位t(3;9)(p14;p21)驱动。该易位导致CDKN2A/CDKN2B基因座（编码抑癌蛋白p16和p15）纯合缺失，从而赋予细胞抵抗钙诱导衰老的能力，并在维持近二倍体核型的同时实现无限增殖。

两类细胞的培养差异：

• MCF 10A：在生理钙浓度（1.05 mM）中诱导分化，而在低钙浓度（0.04 mM）中促进增殖。

• MCF 10F：在低钙浓度（0.04 mM）下维持其生长特性，而高钙浓度则会诱导细胞形态的改变。

二. MCF 10A培养信息

1、生长特性：上皮细胞样，贴壁生长

2、培养方案：DMEM/F12+5% 马血清+20 ng/mL EGF+0.5 μg/mL 皮质醇+10 μg/mL 重组人胰岛素溶液+1% 非必需氨基酸溶液（NEAA）+1%青霉素-链霉素溶液（双抗）

3、推荐传代比例：1:2-1:4

4、推荐换液频率：2-3次/周

5、冻存液：55% 基础培养基+40% FBS+5% DMSO

6、冻存温度：液氮

三. MCF 10A 培养状态

MCF 10A为上皮样细胞，单层贴壁生长，呈鹅卵石装排列。培养过程中，细胞会逐渐聚集成片生长。细胞倍增周期通常在3-4天，实际的倍增周期受到培养体系的影响。传代后贴壁速度较慢，一般4 h左右，细胞开始在底面附着，但贴壁展开的过程较慢；24 h后细胞才完全展开并开始有明显增殖。在36 h后，细胞会逐渐聚集并形成紧密连接的片状结构（见图1）。

图1.  MCF 10A传代后状态变化

四. MCF 10A培养小技巧

1、关注消化状态

MCF 10A细胞贴壁牢固，消化速度相对较慢。在进行传代操作时，可将消化时间延长至10-15 分钟（见图2），也可以采用分次消化的方式，确保细胞消化充分。在消化过程中，可以轻轻拍打培养瓶使细胞变圆脱落再终止消化。这样可以更好地控制消化过程，避免过度消化导致细胞损伤。

图2. MCF 10A消化过程

2、培养基的选择

DMEM/F12体系是MCF 10A的原始培养条件，但培养基配制较为繁琐。为方便使用，推荐使用MCF 10A细胞专用培养基。这种专用培养基不仅简化了配制过程，还能更好地满足细胞的生长需求，确保细胞的健康生长和良好的状态。

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产品名称	货号	规格
MCF 10A细胞专用培养基	CM-0525	125mL×4
马血清	164215	100 mL、500 mL

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